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pET15b-PEP-1-VP3质粒及构建、PEP-1-VP3融合蛋白及表达
- 专利权人:
- 石小燕
- 发明人:
- 石小燕,邓守恒,陈萍
- 申请号：
- CN201110030897.9
- 公开号：
- CN102618567A
- 申请日:
- 2011.01.28
- 申请国别(地区):
- CN
- 年份:
- 2012
- 代理人:
- 摘要：
- 本发明提出了pET15b-PEP-1-VP3质粒及构建、PEP-1-VP3融合蛋白及表达。具体如下：以PGEX-6P-1/TAT-VP3质粒为模板，设计合成上下游引物进行PCR扩增，扩增条件：起始变性95℃1min，然后执行如下反应条件：95℃30s，68℃3min，35个循环，最后68℃延伸3min。PCR产物经低熔点琼脂糖凝胶电泳后鉴定，回收并纯化366bp的VP3cDNA片段；因表达的PEP-1-VP3融合蛋白主要以包涵体形式存在，将收集的菌体溶于50ml缓冲液A中，400W、10min、间隔5min，4℃超声破菌破包涵体41min。破菌完全的菌液较清，置超速冷冻离心机中20000rpm、4℃离心10min，融合蛋白以可溶性形式存在于上清中，将上清液缓慢加入Ni2+-氮基三乙酸琼脂糖亲和层析柱，上样完毕后，杂交结合3小时。
- 来源网站：
- 中国工程科技知识中心
- 来源网址：
- http://www.ckcest.cn/home/
