本发明公开了一种抗人γδTCR单克隆抗体的重组单链抗体及其编码基因与应用。所述抗人γδTCR单抗的重组单链抗体的重链可变区具有序列表中的SEQ ID No:1的氨基酸残基序列,轻链可变区具有序列表中的SEQ ID No:2的氨基酸残基序列。实验结果表明,重组单链抗体G5‑4ScFv能与γδTCR特异结合;固相化能刺激人PBMC中γδT细胞增殖,2周时其纯度可达90%;扩增得到的γδT细胞在刺激时能有效分泌IFN‑γ和TGF‑α,并能有效杀伤肿瘤细胞系daudi细胞,说明其具有较好的细胞毒作用,可以用于临床上肿瘤的过继免疫治疗。此外,重组单链抗体G5‑4ScFv在应用上有以下优势:1、降低免疫原性,提高了临床应用的安全性;2、分子量小,穿透力强,容易进入实体瘤周围的微环境;3、可大批量生产,提高了产量,降低了成本。本发明将在医学领域特别是γδT细胞的增殖及肿瘤治疗中发挥