本发明公开了一种鉴定番茄严重曲叶病毒的引物和探针及其检测方法。本发明提供了鉴定或辅助鉴定番茄严重曲叶病毒(Tomato severe leaf curl virus,ToSLCV)的组合物,该组合物由一个引物对和一个探针组成的组合物;所述引物对由序列表中序列1和序列2所示的两条单链DNA分子组成;所述探针的序列为序列表中序列3。实验证明利用本发明所提供的引物和探针通过实时荧光PCR的方法可以检测待测样品中是否携带番茄严重曲叶病毒(Tomato severe leaf curl virus,ToSLCV),且该方法具有灵敏准确特异性好的优点。