本发明涉及用分子生物学方法对病毒进行定性、定量检测的引物和探针,特别是涉及用实时荧光定量PCR技术对番茄黄化曲叶病毒进行定性、定量检测的引物、TaqMan探针和试剂盒。该引物的上游引物碱基序列如SEQ ID NO:1所示,下游引物碱基序列如SEQ ID NO:2所示。探针的DNA序列如SEQ ID NO:3所示,探针的5’端标记有报告荧光基团,3’端标记有淬灭荧光基团。试剂盒包括上述的引物和探针。本发明所提供的引物及探针可用于番茄黄化曲叶病毒的定性及定量分析,对判断病毒在植物体内定植规律、复制水平和用药后病毒是否被清除等方面的研究具有重要意义。将在番茄黄化曲叶病毒的大规模检疫、流行病学调查及早期诊断方面发挥重要作用。