本发明提供了一种用T7噬菌体RNA聚合酶和T7启动子系统在哺乳动物细胞表达蛋白的方法，所述方法包括如下步骤：(1)根据哺乳动物细胞偏爱密码子优化原始T7RNA聚合酶基因序列，在所述基因序列上、下游分别加入酶切位点，并在下游添加SV40T‑Antigen核定位序列；基因合成的T7RNA聚合酶基因序列如SEQ ID NO:1所示；(2)将所述合成的T7RNA聚合酶基因克隆到质粒pUC57中，通过酶切位点连接到pcDNA3.1真核表达载体上，构建得到pcDNA3.1‑RNAP质粒；(3)将待表达基因两端分别加入T7启动子，IRES和T7终止子，然后连接到pUC57载体上，构建得到待表达基因的质粒；(4)将步骤(2)和(3)中得到的质粒作为双质粒共表达系统，以共转染真核细胞，以及表达蛋白。本发明提高了哺乳表达系统的表达量。
