一种无缝基因克隆方法
- 专利权人:
- 湖北省农业科学院畜牧兽医研究所
- 发明人:
- 毕延震,郑新民,乔宪凤,刘西梅,周荆荣,华文君,李莉,肖红卫,张立苹,华再东,魏庆信
- 申请号：
- CN201010582369.X
- 公开号：
- CN102080075B
- 申请日:
- 2010.12.10
- 申请国别(地区):
- 中国
- 年份:
- 2012
- 代理人:
- 张火春
- 摘要：
- 本发明公开了一种不含有人工碱基的无缝基因克隆方法，步骤有:i)根据目的基因和目标载体的序列，设计、合成嵌合体引物；ii)实施一步二元式搭桥耦联长距离PCR,获得融合线性片段；iii)DpnI消化PCR产物,去除带甲基化的模板质粒DNA;iv)转化大肠杆菌菌株DH5α；v)挑取单克隆菌落测序鉴定；vi)酶切确认重组质粒的整合情况。该方法不需要特殊的限制性内切酶和连接酶以及碱性磷酸酶，而且可以将任意目的基因融入任意目标载体的任意位置。该方法原理简单，操作简便，位点精确可控，阳性率高，适用范围广。
- 来源网站：
- 中国工程科技知识中心
