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克隆目标DNA片段的方法及载体
- 专利权人:
- 南通大学
- 发明人:
- 苗靳
- 申请号：
- CN201710264591.7
- 公开号：
- CN108728468A
- 申请日:
- 2017.04.21
- 申请国别(地区):
- 中国
- 年份:
- 2018
- 代理人:
- 郭栋梁
- 摘要：
- 本发明提供了克隆目标DNA片段的方法及载体，所述方法包括：识别位于目标DNA片段的一侧的CRISPR‑Cas9识别位点以及分别位于所述目标DNA片段两侧的整合位点和第一重组位点，所述第一重组位点位于所述目标DNA片段与所述CRISPR‑Cas9识别位点的之间；将整合位点、识别位点以及第一重组位点克隆到载体中，将spacer序列整合到所述载体上sgRNA序列的5’端；通过同源重组将将所述载体整合到所述目标DNA片段所在的遗传物质上；诱导所述阳性克隆的Cas9编码序列的表达，切割产生的片段两端的两个第一重组位点之间发生同源重组；筛选携带所述目标DNA片段的质粒。本发明的方法步骤简单，成本低，效率高，特别适用从生物体中克隆大的目标DNA片段。
- 来源网站：
- 中国工程科技知识中心
- 来源网址：
- http://www.ckcest.cn/home/
