Multispectral imaging of samples, in particular of biological tissues. A method for acquisition of fluorescence images and reflection images of an object including alternatingly illuminating the object with at least a first light and a second light, wherein the first light and the second light are spectrally shaped such that at least one light has several spectral regions of high light intensity separated by spectral region(s) of low light intensity, wherein the spectral regions of the first light and the second light with high intensity at least partially do not overlap and wherein at least one of the two lights has at least one region of low light intensity that is of longer wavelength to the neighboring region of high light intensity, and recording at least a first image of the object and a second image of the object while illuminating the object with at least one of the lights.La présente invention concerne l'imagerie multispectrale d'échantillons, en particulier de tissus biologiques. L'invention concerne également un procédé d'acquisition d'images de fluorescence et de réflexion d'un objet (400) comprenant les étapes consistant à éclairer alternativement l'objet (400) à l'aide d'au moins une première lumière et d'une seconde lumière, la première lumière et la seconde lumière étant spectralement telles à ce qu'au moins une lumière comprenne plusieurs régions spectrales de haute intensité lumineuse séparées par une ou plusieurs régions spectrales de faible intensité lumineuse, les régions spectrales de la première lumière et de la seconde lumière à intensité élevée ne se chevauchent pas, au moins partiellement, et au moins l'une des deux lumières présentant au moins une région de faible intensité lumineuse dont la longueur d'onde est supérieure à celle de la région voisine d'intensité lumineuse élevée, et à enregistrer au moins une première image de l'objet (400) et une seconde image de l'objet (400) tout en éclairant l'objet (400) à l'aide d'au moins l'une des
