本发明提供了一种棉花启动子GbU6‑7PS及应用,该启动子的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示,其互补链的核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示;本发明棉花启动子GbU6‑7PS通过进行第一轮PCR扩增获得覆盖全长GbU6‑7启动子序列的片段,得到GbU6‑7P;再通过第二轮PCR扩增,以GbU6‑7P为供体质粒模板,以GbU6‑5P::GUS为受体质粒模板,采用Transfer PCR方法对GbU6‑7P启动子进行截短克隆后得到。本发明的棉花启动子GbU6‑7PS不仅适合用于棉花,而且片段很短,长度只有190bp,符合构建CRISPR/Cas9基因组编辑载体的要求,能显著提高sgRNA的转录水平,进而可能提高基因组编辑效率。