一组不同启动子介导的蛋白酶高通量筛选载体及筛选方法
- 专利权人:
- 湖北大学
- 发明人:
- 易犁,周瑜,张桂敏,彭文舫,马立新,马延和
- 申请号：
- CN201510802312.9
- 公开号：
- CN105349569A
- 申请日:
- 2015.11.19
- 申请国别(地区):
- 中国
- 年份:
- 2016
- 代理人:
- 朱必武
- 摘要：
- 本发明公开了一组不同启动子介导的蛋白酶高通量筛选载体及筛选方法。本发明通过在pESD载体上插入不同转录强度的启动子GALX，构建了GALX–pESD-GAL1/GAL10-Aga2-FLAG-HA重组质粒，在相应的启动子后插入底物序列与酶突变体库，利用荧光标记技术和流式细胞仪检测细胞表面展示的蛋白，根据细胞表面荧光的强弱，从而分析底物与酶的不同比例下底物的酶切情况。这种方法在蛋白酶进化过程中，可以控制酶与底物的浓度在1:2到1:100之间，利用启动子转录的强弱来逐步提高酶活，最终获得高活性的蛋白酶突变体。
- 来源网站：
- 中国工程科技知识中心
