本发明属于生物工程技术领域,公开了铜绿假单胞菌噬菌体裂解酶、其编码基因、重组表达载体及其制备方法和应用。铜绿假单胞菌噬菌体裂解酶的氨基酸序列和核苷酸序列分别如Seq ID No.1和Seq ID No.2所示,将所述铜绿假单胞菌噬菌体裂解酶的核苷酸序列与载体重组构成重组表达载体,并将该重组表达载体转化入宿主菌构成重组工程菌。本发明的优点在于,本发明提供的铜绿假单胞菌噬菌体裂解酶在体外对铜绿假单胞菌具有较强的裂解活性,可用于制备抑制铜绿假单胞菌的试剂,如制作防治铜绿假单胞菌的抗菌剂以及消毒剂等。本发明提供的铜绿假单胞菌噬菌体裂解酶的制备方法可实现所述铜绿假单胞菌噬菌体裂解酶的大量表达及制备,且分离纯化简单,成本低。