本发明提供一种用于耐甲氧西林和/或耐四环素金黄色葡萄球菌检测的组合物,包括,引物对SEQ ID NO.1/2,以及,引物对SEQ ID NO.3/4和SEQ ID NO.5/6中的至少一对引物。并在此基础上进一步建立mPCR-DHPLC/电泳检测试剂盒及方法,检测食品中致病性金黄色葡萄球菌、MRSA及耐四环素的金黄色葡萄球菌耐药菌株。使用本发明所述的组合物及方法对对金黄色葡萄球菌进行菌属鉴定的同时,可同时检测MRSA及四环素耐药基因,在一次检测中即同时鉴定样品中的金黄色葡萄球菌、MRSA及耐红霉素金黄色葡萄球菌。具有快速高通量的优点,并且检侧耗时短,操作简捷,可以节省大量的劳力和财力,适合快速检测的要求。