本发明公开了检测非洲猪瘟病毒的PCR引物、试剂盒及其应用,属于非洲猪瘟病毒的检测领域。本发明首先根据GenBank上ASFV p72基因的保守区域设计了4对引物,从中筛选出特异性强、敏感性高的引物,该引物由SEQ ID No.1和SEQ ID No.2所示的核苷酸序列组成。本发明进一步公开了用所述引物制备得到的检测非洲猪瘟病毒的试剂盒并建立了相应的PCR检测方法,本发明建立的检测方法比OIE推荐的两种非洲猪瘟病毒PCR检测方法更特异、更敏感;临床样品检测结果表明本发明PCR检测方法操作简单,成本低,特异性好,敏感性高,能有效的应用于非洲猪瘟的筛查和快速诊断。