本发明属于细菌性抗原技术领域,公开了一种铜绿假单胞菌疫苗重组蛋白reFPO及制备方法和应用,所述铜绿假单胞菌疫苗重组蛋白reFPO的核苷酸序列为SEQ ID NO:1;氨基酸序列为SEQ ID NO:2;重组表达载体包含核苷酸序列SEQ ID NO:1。本发明采用pGEX‑6p‑1载体来构建重组表达质粒,表达重组蛋白reFPO,pGEX是表达融合蛋白的载体,所表达的融合蛋白中含有一个蛋白纯化的GST标签。与其他融合载体相比,pGEX系列载体具有纯化条件温和、步骤简单、不需要变性剂的加入,从而使纯化后的蛋白能最大限度保持其空间构象和免疫原性。