本发明涉及细菌性抗原技术领域,公开了铜绿假单胞菌疫苗重组蛋白reSBP‑ExoU及制备方法和应用,该疫苗重组蛋白的氨基酸序列如SEQ ID NO:1所示。本发明提供的重组蛋白reSBP‑ExoU由部分SBP蛋白(Ala22‑Phe260)和部分无毒ExoU突变体(Ser100‑Asn360,S142A和Asp344Ala)通过柔性Linker—GSGGSG分子融合连接而成,该重组蛋白reSBP‑ExoU不仅解决了reSBP蛋白与人体适用的佐剂吸附差、reExoU不稳定的问题,还具有较好的免疫原性和免疫保护效果,这对下一步开发铜绿假单胞菌疫苗等免疫调控手段具有重要的意义。