本发明公开了一种水稻抗稻瘟病基因Pi 25的分子标记P25-1,它是用引物对SEQ ID NO:1和SEQ ID NO:2从水稻总DNA中扩增出来的核苷酸序列,可以应用于水稻稻瘟病抗性育种中Pi 25基因分子标记辅助选择,以提高分子标记辅助选择的效率和新品种培育的效率。本发明还公开了获得P25-1的引物对SEQ ID NO:1和SEQ ID NO:2,SEQ ID NO:1核苷酸序列为GGACAGAGCAGGAACTTCAGATG,SEQ ID NO:2的核苷酸序列为TTCTGGGTCTCAGGCGTACT。该引物对能对水稻苗期所提取的DNA进行标记鉴定,检测是否具有抗稻瘟病基因Pi 25,检测的准确性高。