本发明提供一组用于牛源性实时荧光PCR检测的特异性引物和探针,核苷酸序列为(1)或(2)中的一种:(1)、上游引物:5'-TCCTTCTGCTCACAGTAATAGCCACA-3',下游引物:5'-CGAAGAATCGGGTAAGGGTTGC-3',探针:5'-CTGAGGAGCAACAGTCATCACCAACC-3'所述引物和探针扩增的目标核苷酸序列为序列表中SEQ ID No.3;(2)、与(1)所述序列互补的序列。本发明所提供的引物和探针可对牛肉和动物饲料中的牛源性含量进行定性、定量分析,对判断牛肉和动物饲料中牛源性含量具有重要意义,本发明将在食品检测领域发挥重要作用。