The invention relates to a method of preparing complexes of charged polymer(s) and a single molecule of interest having an opposite charge, in particular polyplexes comprising a cationic polymer and a single nucleic acid molecule, in particular a plasmid. The invention also relates to the complexes obtained by the method and their use for in vitro, ex vivo and in vivo transfection of charged molecules of interest, in particular therapeutic molecules, such as in particular nucleic acids.Linvention est relative à un procédé de préparation de complexes de polymère(s) chargé(s) et dune seule molécule dintérêt de charge opposée, en particulier de polyplexes comprenant un polymère cat ionique et une seule molécule dacide nucléique, notamment un plasmide. La présente invention concerne également les complexes obtenus par le procédé et leur utilisation pour la transfection in vitro, ex vivo et in vivo de molécules dintérêt chargées, en particulier des molécules thérapeutique, telles que notamment des acides nucléiques.