本发明公开了一种中国大鲵雌性特异标记及应用，步骤是：A、克隆与验证特异片段：1）中国大鲵RAD候选雌性特异片段分析；2）PCR产物回收，克隆，测序;3）克隆测序序列的分析。B、组织切片鉴定生理性别：1）将收集的大鲵性腺样本固定、保存。2）将样品进行逐级乙醇脱水；3）将性腺组织切片、观察鉴定大鲵生理性别；C、遗传性别鉴定体系建立：1）基因组DNA提取；2）设计特异引物：克隆验证后序列SEQ ID NO.1、SEQ ID NO.2所示的核苷酸序列；3）根据反应体系进行PCR扩增；D、特异分子标记在大鲵普通个体以及性反转个体性别鉴定中的应用。该标记操作简单、准确可靠，可通过无损伤采样鉴定大鲵遗传性别。首次建立大鲵性别及性反转大鲵鉴定系统，为大鲵遗传性别鉴定提供简单易行的分子生物学方法，也为后续大鲵性控育种提供一种途径。
