本发明公开靶向survivin纳米抗体及其制备方法和应用,将与survivin具有高亲和力的多肽组合作为纳米抗体互补决定区的非保守序列,通过基因操作将这些非保守序列分别整合到纳米抗体一致性框架中,获得嵌合纳米抗体。与survivin具有高亲和力的多肽组合包括七肽和十二肽,所述七肽序列如SEQ ID NO:1——SEQ ID NO:5任一所示,所述十二肽序列如SEQ ID NO:6——SEQ ID NO:7任一所示。本发明制备的纳米抗体体积小,免疫原性小,稳定性好,可溶性高,吸收好,人源化简单,表达容易,偶联其他分子容易,并可用于诊断\成像\示踪。因此,作为抗体药物有着广阔的应用前景。