本发明公开了一种葡萄糖氧化酶突变体编码基因及制备方法和应用。这种高活力葡萄糖氧化酶突变体的编码基因具有SEQ ID NO.1所示的核苷酸序列,其编码的蛋白具有SEQ ID NO.2所示的氨基酸序列,其步骤是:首先设计一对诱变引物;第二是获得大肠杆菌菌株DH5α/GOD-A137S;第三是鉴定重组质粒pPIC9kGOD-A137S;第四是培养大肠杆菌菌株DH5α/GOD-A137S;第五是得到含突变基因的线性DNA;第六是获得毕赤酵母菌株GS115/GOD-A137S;第七是诱导纯化获得目的蛋白。本发明方法易行,成本低廉,高酶活葡萄糖氧化酶突变株蛋白在食品糖类检测和保鲜中的应用,具有很高的实用价值。