The invention provides improved methods to prepare protein conjugates from a ketone-modified protein. In one embodiment, the protein is prepared by linking two free cysteines by reaction with a 1,3-dihaloacetone or similar ketone-containing reactant, linking the sulfur atoms of the two cysteines together. The ketone inserted between the sulfur atoms is then used to form an oxime, thus conjugating the protein to a payload. In another embodiment, two cysteine residues are tied together by reaction with a 1,3-dihaloacetone or similar reactant, and the new ketone is used to form an oxime with a suitable payload molecule, thus conjugating the protein to a payload. The method provides improved reaction conditions for the oxime formation, whereby higher yields and Improved product homogeneity are achieved.La invención proporciona métodos mejorados para preparar conjugados de proteína a partir de una proteína modificada con cetona. En una modalidad, la proteína se prepara mediante el enlace de dos cisteínas libres mediante la reacción con una 1,3-di-halo-acetona o con un reactivo que contenga cetona similar, enlazando los átomos de azufre de las dos cisteínas entre sí. La cetona insertada entre los átomos de azufre se utiliza entonces para formar una oxima, conjugando de esta manera la proteína con una carga útil. En otra modalidad, se enlazan dos residuos de cisteína entre sí mediante la reacción con una 1,3-di-halo-acetona o con un reactivo similar, y la nueva cetona se utiliza para formar una oxima con una molécula de carga útil adecuada, conjugando de esta manera la proteína con una carga útil. El método proporciona condiciones de reacción mejoradas para la formación de oxima, en donde se logran rendimientos más altos y una mayor homogeneidad del producto.
