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一种EYFP基因标记根瘤菌的方法
- 专利权人:
- 黑龙江省科学院微生物研究所
- 发明人:
- 于徳水,甄涛,张先成,于盛竹,曲娟娟
- 申请号：
- CN201610847787.4
- 公开号：
- CN106434726A
- 申请日:
- 2016.09.23
- 申请国别(地区):
- 中国
- 年份:
- 2017
- 代理人:
- 荣玲
- 摘要：
- 本发明公开了一种EYFP基因标记根瘤菌的方法，所述方法包括以下步骤：一、将EYFP‑pUC19载体酶切纯化后获得EYFP产物；二、将EYFP产物与载体pBBR1MCS‑2相连，酶切验证，将构建的EYFP‑pBBR1MCS‑2转入E.coli DH5α中；三、将供体菌EYFP‑pBBR1MCS‑2、辅助菌pRK2013、受体菌慢生型大豆根瘤菌三亲本杂交；四、同源重组：通过在KmR的平板上生长，筛选重组子；五、PCR验证，确定筛选的重组子已经插入到慢生型大豆根瘤菌的基因组中，而基因组中不含有野生株；六、显微镜下观察EYFP蛋白基因表达。本发明采用同源重组的方法，将EYFP与载体pBBR1MCS‑2连接，通过KmR抗性筛选重组子后，采用PCR法筛选突变株，确保插入染色中，使其稳定表达。
- 来源网站：
- 中国工程科技知识中心
- 来源网址：
- http://www.ckcest.cn/home/
