本发明公开了一种鉴定大豆细胞核雄性不育系的分子标记及其鉴定方法,该分子标记具有如SEQ ID NO:1所示的核苷酸序列,该鉴定方法以大豆植物组织基因组DNA为模板,所述分子标记为目的基因,进行PCR扩增,获得扩增片段,用以判断大豆细胞核的育性;该方法提供了一种新的大豆细胞核雄性不育系的鉴定途径,适合于大豆细胞核雄性不育系的早期鉴定,还提供了一对具有如SEQ ID NO:2和SEQ ID NO:3所示的核苷酸序列的特异性引物,该引物获得的扩增片段长度适中,与降解的小片段序列差异明显,避免了假阳性结果的出现,同时电泳条带清晰、亮度高,鉴定结果一目了然,大豆细胞核雄性不育系的检出率高。