本发明公开了一种基于线粒体COⅠ基因的畜禽肉中猪牛羊源性成分PCR专用引物对及鉴定方法与试剂盒,属于食品检测技术领域。根据猪、牛、羊、兔、鸽、鹌鹑、鸡、鸭、鹅9种动物COⅠ基因的差异位点,设计猪、牛、羊三种动物特异性引物,见序列表SEQ ID NO.1、SEQ ID NO.2、SEQ ID NO.3、SEQ ID NO.4、SEQ ID NO.5、SEQ ID NO.6。鉴定方法:提取待测物种总DNA,进行PCR扩增。试剂盒,包括SEQ ID NO.1‑6。本发明引物均仅对各自物种目标片段进行特异性扩增,不会与其他物种发生反应,方法灵敏度较高,简便快速,能有效鉴别出畜禽肉中猪、牛、羊源性成分,从而抵御牛、羊肉掺杂掺假现象。同时,将所设计的引物SEQ ID NO.1‑6配合相关的试剂可以制成试剂盒,具有良好的工业化生产应用前景。