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一种固氮基因nifDK基因敲除的方法
- 专利权人:
- 黑龙江省科学院微生物研究所
- 发明人:
- 甄涛
- 申请号：
- CN201610835340.5
- 公开号：
- CN106282218A
- 申请日:
- 2016.09.20
- 申请国别(地区):
- 中国
- 年份:
- 2017
- 代理人:
- 荣玲
- 摘要：
- 本发明公开了一种固氮基因nifDK基因敲除的方法，其步骤如下：一、PCR扩增慢生型大豆根瘤菌中的nifDK基因上下游片段，分别为nifDK‑AB和nifDK‑CD；二、以nifDK‑AB和nifDK‑CD的PCR产物为模板进行融合PCR，PCR扩增nifDK‑AD；三、将nifDK‑AD与载体pK18mobsacB相连，酶切验证，将nifDK‑AD转入E.coli DH5α中；四、将供体菌nifDK‑AD、辅助菌pRK2013、受体菌三亲本杂交；五、第一次筛选重组子；六、第二次筛选重组子；七、PCR验证。本发明采用融合PCR的方法，将融合片段与质粒pK18mobsacB连接，通过KmR抗性筛选和sacB在10％蔗糖的筛选压力迫使其发生双交换，在2次同源重组后，采用PCR法筛选突变株，提高了筛选成功率。
- 来源网站：
- 中国工程科技知识中心
- 来源网址：
- http://www.ckcest.cn/home/
