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一种检测小麦条锈菌促分裂原活化蛋白激酶1基因(Mapk1)SNP位点的方法
- 专利权人:
- 云南省农业科学院农业环境资源研究所
- 发明人:
- 李明菊,陈万权,李昊星,刘太国,段霞瑜,程加省,徐志,毕云青,张庆,许韬
- 申请号:
- CN201410353110.6
- 公开号:
- CN104141010A
- 申请日:
- 2014.07.21
- 申请国别(地区):
- 中国
- 年份:
- 2014
- 代理人:
- 汤东凤
- 摘要:
- 一种检测小麦条锈菌促分裂原活化蛋白激酶1基因(Mapk1)SNP位点的方法,使用本发明的专用引物对条锈菌DNA进行PCR扩增,然后测序,经过与标准序列比对,从而检测到所测序列的SNP位点,其中专用引物为:正向引物:Map1351S:5'GTCGGTCGGGTGTATCCT3';反向引物:Map1683A:5'GGTT CATCTTCGGGGTCA3'。PCR反应体系:为20μl,其中,样品DNA,20ng/μl,1μl;Primer S和A(10μM)各1μl;2×Taq PCR MasterMix,10μl;ddH2O,7μl。2×Taq PCR MasterMix成分:0.1U Taq Polymerase/μl,500μM dNTP ea ch,20mMTris-HCl(PH8.3),100mM KCl,3mM MgCl2,其它稳定剂和增强剂。PCR反应程序:(96℃,5min)1cycle;(96℃,25s,55℃,25s,72℃,45s)34cycles;72℃延伸5min。本发明技术方案操作简单,耗时少,且测序结果比指纹结果更为可靠,更能揭示分子水平上的细节问题,为我们研究提供更多的信息。
- 来源网站:
- 中国工程科技知识中心
- 来源网址:
- http://www.ckcest.cn/home/