本发明属于生物技术领域,涉及一种重组腺相关病毒载体、重组腺相关病毒及其应用。该重组腺相关病毒载体为将PD‑1细胞外段核苷酸序列插入腺相关病毒载体而形成的载体;所述PD‑1细胞外段核苷酸序列如SEQ ID NO:1所示。本发明提供的重组腺相关病毒载体,将PD1的胞外段(共170个氨基酸)插入至腺相关病毒AAV8表达后分泌出可溶性PD1,这样就能够通过可溶性PD1与肿瘤细胞上的PDL1结合,有效阻断PD‑1/PD‑L1信号通路,以阻止肿瘤细胞上的PDL1与T细胞上PD1结合而避免T细胞耗竭,改善宿主的T细胞功能,提高免疫细胞对肿瘤细胞的杀伤作用,并且对正常的细胞、组织和器官几乎无损伤,具有极高的安全性和可靠性。