本发明公开了一种表达鸭坦布苏病毒E蛋白的重组鸭瘟病毒及其构建方法和应用，该重组鸭瘟病毒的基因组中插入有鸭坦布苏病毒E蛋白基因，所述鸭坦布苏病毒E蛋白基因的核苷酸序列如SEQ ID NO.9所示。所述构建方法包括：(1)将pDEV-vac中gfp基因的CMV启动子替换成EF1启动子，获得pDEV-EF1；(2)将Pcmv-E-BGH-pA表达框插入pDEV-EF1，获得pDEV-E；(3)将pDEV-E转染鸡胚成纤维细胞，拯救获得所述重组鸭瘟病毒。所述重组鸭瘟病毒与亲本毒株相比，其病毒蚀斑大小不具有显著差异，说明鸭坦布苏病毒E蛋白基因的插入不影响鸭瘟病毒在鸡胚成纤维细胞上的扩散。所述重组鸭瘟病毒感染鸡胚成纤维细胞后成功表达E蛋白，为鸭瘟病毒-鸭坦布苏病毒二联疫苗的研制奠定了基础。
