本发明涉及生物医药领域,具体为一种抑制人口腔癌细胞PRPS2表达的shRNA及其载体的构建和应用,本发明提供了一种抑制人口腔癌细胞PRPS2表达的shRNA,如SEQ ID NO.1,靶序列如SEQ ID NO:2,该shRNA通过如SEQ ID NO.3所示的DNA模板序列转录生成,将模板序列与线性化载体重组后,再与hTERT启动子序列重组,获得抑制人口腔癌细胞PRPS2表达的shRNA真核表达质粒;经验证,真核表达质粒载体在人DOK细胞和KB细胞中能稳定持续的降低PRPS2mRNA和蛋白表达水平,导致细胞增殖抑制、细胞周期阻遏、凋亡发生,克服了体外化学合成siRNA的作用时间短、毒性大等缺点。