The invention concerns a method for monitoring the diffusion over time of a fluorescent marker within a biological tissue. This method involves carrying out an operation allowing the pixel-by-pixel comparison of two fluorescence images obtained after different periods have elapsed since the injection of a fluorophore, and displaying an image representative of the result of the comparison operation. The invention also relates to a device for implementing the method.L'invention concerne un procédé de suivi de la diffusion dans le temps d'un marqueur fluorescent au sein d'un tissu biologique. Selon, ce procédé on réalise une opération permettant de comparer pixel par pixel, deux images de fluorescence obtenues après des délais différents écoulés depuis l'injection d'un fluorophore, et on affiche une image représentative du résultat de l'opération de comparaison. L'invention concerne également un dispositif pour la mise en œuvre du procédé.