HELLER, Ryan Charles,WOOD, Nichole Lea,DUTHIE, Robert Scott,NELSON, John Richard,GAO, Wei,RISHEL, Michael James,HENTRICH, Klaus Gustav
申请号：
USUS2015/050760
公开号：
WO2016/053638A1
申请日:
2015.09.17
申请国别(地区):
WO
年份:
2016
代理人:
摘要：
A method is provided for generating single-stranded DNA circles from a biological sample. The method comprises the steps of: treating the biological sample with an extractant to release nucleic acids, thereby forming a sample mixture neutralizing the extractant denaturing the released nucleic acids to generate single-stranded nucleic acids and contacting the single-stranded nucleic acids with a ligase that is capable of template-independent, intramolecular ligation of single-stranded DNA to generate the single-stranded DNA circles. All the steps of the method are performed without any intermediate nucleic acid isolation or nucleic acid purification. The single-stranded DNA circles may be amplified and further analyzed. Also provided is a kit which comprises compositions for carrying out the novel methods.Linvention concerne un procédé permettant de produire des molécules circulaires dADN simple brin à partir dun échantillon biologique. Le procédé comprend les étapes consistant : à traiter léchantillon biologique avec un agent dextraction pour libérer des acides nucléiques, formant ainsi un mélange échantillon à neutraliser lagent dextraction à dénaturer les acides nucléiques libérés pour produire des acides nucléiques simple brin et à mettre en contact les acides nucléiques simple brin avec une ligase qui est capable de ligature intramoléculaire, indépendante de la matrice dADN simple brin pour produire les molécules circulaires dADN simple brin. Toutes les étapes du procédé sont effectuées sans isolement dacide nucléique ou de purification dacide nucléique intermédiaire. Les molécules circulaires dADN simple brin peuvent être amplifiées et soumises à des analyses complémentaires. Linvention concerne également un kit qui comprend des compositions permettant de mettre en œuvre les nouveaux procédés.
