本发明公开了与黄瓜抗、感黑斑病基因紧密连锁的基因片段及抗性鉴定方法，用于鉴定黄瓜黑斑病抗性的引物序列，由上游引物和下游引物组成，上游引物是SEQ ID No1所述序列，下游引物是SEQ ID No2所述序列。利用本发明的引物序列及其扩增出的黄瓜抗黑斑病基因片段和黄瓜感黑斑病基因片段对构建的F2代分离群体和黄瓜种质资源进行黑斑病抗性评价，其结果与人工接种鉴定符合率分别达95.60%、93.42%，在黄瓜育种中进行资源抗性筛选具有很大的应用价值。以这些序列为依据，可以进行抗黑斑病标记辅助选择、育种，用作黄瓜育种中检测黄瓜抗黑斑病基因的探针；可以为进行抗黑斑病基因定位、作图与克隆。
