本发明提供一种猪源杂合防御肽PL‑5及其制备方法和应用,其序列如序列表SEQ ID No.5所示。本发明首先分析猪源防御肽PMAP‑23的氨基酸组成和排列特点,通过取代或截取方式取得N末端或C末端区域,并与LPS绑定序列相互连接,获得不同长度的杂合肽;然后使合成多肽;将合成的多肽进行纯化,并利谱法进行鉴定;最后,通过最小抑菌浓度和溶血试验测定猪源杂合肽的抑菌活性和细胞毒性,筛选具有较理想活性的多肽。本发明的有益效果:(1)该多肽衍生自猪源防御肽PMAP‑23,安全性较好,具有广谱抗菌活性和无残留特点;(2)该多肽由23个氨基酸组成,肽链较短,制备方法和技术成熟,合成成本低。