本发明公开了一种用于鉴定黄瓜黑星病抗性的引物序列及其鉴定方法,引物序列是由具有序列表中SEQ ID No1所述的核苷酸序列的上游引物和具有序列表中SEQ ID No2所述的核苷酸序列的下游引物组成;一种鉴定黄瓜黑星病抗性的方法,其步骤:(1)提取黄瓜基因组DNA;(2)用序列表中SEQ ID No1所述的核苷酸序列及SEQ ID No2所述的核苷酸序列进行PCR扩增;(3)PCR扩增产物的凝胶电泳分析;(4)依据各被鉴定样品在凝胶上条带的有无鉴定黄瓜黑星病的抗性,本发明鉴定结果与田间抗病吻合率达95%,且具有快速、准确、不受环境条件影响等优点,在黄瓜黑星病抗性筛选上具有很大的应用价值。