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一种均相定量比较未纯化酶及其突变体比活性的方法
- 专利权人:
- 重庆医科大学
- 发明人:
- 廖飞,杨晓兰,胡小蕾,冯一然,种慧敏,李雨薇
- 申请号：
- CN201510996035.X
- 公开号：
- CN105527432A
- 申请日:
- 2015.12.28
- 申请国别(地区):
- 中国
- 年份:
- 2016
- 代理人:
- 摘要：
- 一种均相定量比较未纯化酶及其突变体比活性的方法，涉及如下步骤：重组表达需比较比活性的起始酶及其突变体；超声、化学裂解或冻融裂解宿主细胞，离心上清液用0.22μm滤膜过滤后的滤液为样品；用纯化后起始酶或某个突变体为免疫原，免疫哺乳动物所得抗血清为多抗；用聚乙二醇促进免疫复合物形成，测定样品和多抗反应混合物在310到410nm间某波长下光密度与630到800nm间某波长下光密度之差为检测信号，用前述免疫原为参考品建立选择性测定样品中起始酶及其突变体蛋白量的免疫比浊法；用此免疫比浊法均相测定样品中起始酶或其突变体的蛋白量，据样品中酶活性换算成比活性用于排序或计算相对值进行比较。此方法效率高且不依赖于融合标签表达酶及其突变体。
- 来源网站：
- 中国工程科技知识中心
- 来源网址：
- http://www.ckcest.cn/home/
