The present invention relates to a method for preparing a heterogeneous keratoplasty material, wherein different concentrations of glycerol have been used to achieve transparency, non-cell and non-viral characteristics of the heterogeneous keratoplasty during the whole process The resistance to degradation and the immunity of collagen can be further reduced by crosslinking of the collagen (3-dimethylaminopropyl)-3-ethylcarbodiimide (EDC), which is a cross-linking agent, and N-hydroxysulfosuccinic acid N-hydroxy sulfosuccinimide (NHS) was used for cross-linking to form a corneal graft similar to that of the original cornea and to improve biomechanical properties. This method can produce a heterogeneous kerato implant with high transparency, low immunogenicity and good biological activity and biocompatibility and can maintain the three dimensional structure of collagen similar to the original cornea. The corneal graft material prepared by the method of the present invention can improve the transparency of the corneal collagen fiber structure and post-transplantation retention, which can be widely used in the medical field.본 발명은 이종 각막 이식재의 제조방법에 관한 것으로서, 상기 제조 전체 과정에서, 이종 각막 이식편의 투명성, 비세포 및 비바이러스적 특성을 달성하고자 다른 농도의 글리세롤이 이용되었고 퇴화에 대한 저항성 및 콜라겐의 면역성은 콜라겐의 가교에 의해 더욱 감소될 수 있으며 상기 안구 전체가 유지되는 조건 하에서, 가교제인 1-(3-디메틸아미노프로필)-3-에틸카르보디이미드 (1-(3-dimethylaminopropyl)-3-ethylcarbodiimide, EDC) 및 N-하이드록시술포숙신이미드 (N-hydroxy sulfosuccinimide, NHS)가 가교를 위해 이용되었는바, 본래의 각막과 유사한 각막 이식재를 형성할 수 있게 하였고, 생물 기계학적 특성을 향상시킬 수 있었다. 상기 방법은 높은 투명도, 낮은 면역원성 및 우수한 생물학적 활성 및 생체 적합성을 가지는 이종 각막 이식재를 제조할 수 있고, 본래의 각막과 유사한 콜라겐의 3차원적 구조를 유지할 수 있다. 본 발명의 방법에 의해 제조된 각막 이식재는 각막 콜라겐 섬유 구조의 유지 및 이식 후의 투명도를 향상시킬 수 있고, 이는 의약 분야에서 널리 이용될 수 있을 것이다.