DE NÓBREGA, Franklin Luzia,BROUNS, Stan Johan Jozef
申请号：
NLNL2019/050738
公开号：
WO2020/101486A1
申请日:
2019.11.12
申请国别(地区):
NL
年份:
2020
代理人:
摘要：
The invention provides a method for the generation of a bacteriophage insensitive mutant from parent strain cells comprising an active CRISPR-Cas system, the method comprising the stages: -an anti-CRISPR protein exposure stage comprising exposing the parent strain cells to an anti-CRISPR protein suitable for inhibiting the CRISPR-Cas system, wherein the anti-CRISPR protein comprises a protein comprising an amino acid sequence, wherein the amino acid sequence has at least 30% sequence identity with the amino acid sequence of SEQ ID NO:1with respect to a sequence alignment between the amino acid sequence and SEQ ID NO:1, and wherein the sequence alignment has a length ≥ 50% of the sequence length of SEQ ID NO:1； -a bacteriophage exposure stage comprising exposing the parent strain cells to a bacteriophage； -a selection stage comprising selecting the CRISPR-independent bacteriophage insensitive mutant from cells having survived the bacteriophage exposure stage.Procédé de production d'un mutant insensible aux bactériophages à partir de cellules souches parentes comprenant un système CRISPR-Cas actif, le procédé comprenant les étapes suivantes : -exposition aux protéines anti-CRISPR, comprenant l'exposition des cellules souches parentes à une protéine anti-CRISPR appropriée pour Inhiber le système CRISPR-Cas, la protéine anti-CRISPR comprenant une protéine comportant une séquence d'acides aminés, la séquence d'acides aminés possédant au moins 30 % d'identité de séquence avec la séquence d'acides aminés de la SEQ ID NO: 1 par rapport à un alignement de séquence entre la séquence d'acides aminés et la SEQ ID NO : 1, et l'alignement de séquence ayant une longueur ≥ 50 % de la longueur de séquence de SEQ ID NO : 1； -exposition aux bactériophages, consistant à exposer les cellules souches parentes à un bactériophage； -sélection, consistant à sélectionner le mutant insensible aux bactériophages indépendant du CRISPR à partir de cellules ayant survécu l'étape d'exposition aux b
