The present invention discloses a method of preparing an acellular cartilage graft. The method includes a step of subjecting a cartilage matrix derived from an animal to an alkali treatment, a disinfection treatment, and a decellularization treatment. The cartilage graft produced in this way is suitable as a xenograft for the growth of host cells, with no cellular material present and the porosity and integrity of collagen fibers. The present invention also discloses a method for treating osteochondral disease in a subject. In the method, the acellular cartilage graft of the present invention is applied to a lesion site of a subject.本発明は、無細胞軟骨グラフトの調製方法を開示する。該方法は、動物に由来の軟骨基質に、アルカリ処理、消毒処理、脱細胞処理を行うステップを含む。このように作製された軟骨グラフトは、細胞物質が存在していないとともに、コラーゲン線維の多孔性及び完全性が保持され、宿主細胞の増殖のための異種グラフトとして適切である。本発明は、また、被験体の骨軟骨疾患を治療する方法を開示する。該方法では、本発明の無細胞軟骨グラフトを被験体の病変部位に適用する。