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应用于大规模筛选癌症基因的CRISPR/Cas9富集测序方法
- 专利权人:
- 同济大学
- 发明人:
- 蒋征,刘小乐,李绪娟
- 申请号：
- CN201510927424.7
- 公开号：
- CN105400773B
- 申请日:
- 2015.12.14
- 申请国别(地区):
- 中国
- 年份:
- 2018
- 代理人:
- 赵志远
- 摘要：
- 本发明涉及一种应用于大规模筛选癌症基因的CRISPR/Cas9富集测序方法，首先建立sgRNA文库；然后用慢病毒包装sgRNA文库，并收集病毒；之后在癌细胞系中筛选sgRNA文库；再提取筛选所得细胞及筛选前细胞的基因组DNA；最后富集基因组DNA中的sgRNA。与现有技术相比，本发明对CRISPR/Cas细胞的筛选过程做了改进，利用被感染细胞的puromycin抗性，用简便的方法确定了病毒感染效率，确定了病毒MOI值；更重要的是，限制性内切酶切方法与高通量方法的结合，不仅能够有效的获取正确的染色质片段，而且能够降低非特异性PCR扩增产生的假阳性，能够高效扩增sgRNA的DNA模板，提高了建库效率。
- 来源网站：
- 中国工程科技知识中心
- 来源网址：
- http://www.ckcest.cn/home/
