The present invention provides a duck egg yolk anti-freezing agent for cryopreservation of donkey semen and a preparation method thereof. Each 100 milliliters of anti-freezing agent contains the following components: 3 to 4 grams of Tris, 1 to 2.5 grams of glucose, 1.5 to 3.0 grams of citric acid, 5 to 10 milliliters of glycerol, 10 to 30 milliliters of yolk, 450 to 550 thousand IU of penicillin, 45 to 55 thousand IU of streptomycin, and the balance of distilled water. The problems of long reproductive cycle of female animals, low artificial insemination rate, complex production operation of frozen donkey semen and high difficulty in the prior art are solved.La presente invención se refiere a un anticongelante de yema de huevo de pato para la crioconservación de semen de burro y el método de preparación del mismo, cada 100ml de anticongelante contiene los siguientes ingredientes: Tris 3~4 g, glucosa 1~2.5 g, ácido cítrico 1.5~3.0 g, glicerol 5~10 ml, yema de huevo 10~30 ml, penicilina 45~55x104 UI, estreptomicina 4.5~5.5x104 UI, el resto es agua destilada. Se resuelven los problemas existentes de una larga fase de reproducción, baja proporción de concepción artificial y una complicada y difícil producción y funcionamiento del semen de burro congelado.