The methods disclosed herein describe a novel technique that provides unparalleled efficiency, flexibility, utility and speed for stably integrating transgenes into lymphocytes and other mammalian cells. . The new method is based on the use of transposases encoded by mRNA (eg sleeping beauty transposase) in combination with transposable elements encoded by small circle DNA. The new method allows for higher gene transfer rates, while at the same time less toxic than conventional approaches that use transposase encoded in plasmid DNA in combination with transposable elements encoded in plasmid DNA. Applications of the present invention include, but are not limited to, stable integration of transgenes encoding immune receptors (eg, T cell receptors or synthetic chimeric antigen receptors) into human T lymphocytes, The immunoreceptor confers specificity for molecules expressed by tumor cells. Transposase mRNA and transposon small circle DNA can be introduced into lymphocytes by methods including, but not limited to, electroporation and nucleofection.本明細書に開示する方法は、リンパ球並びに他の哺乳動物細胞へ導入遺伝子を安定に組み込むための、他に類のない効率、柔軟性、有用性及び速さを提供する新規技術について記述する。新規の方法は、小環DNAにコードされている転位エレメントと組み合わせたmRNAにコードされているトランスポザーゼ(例えばsleeping beautyトランスポザーゼ)の使用に基づく。新規の方法は、より高い遺伝子移入率を可能にし、それと同時に、プラスミドDNAにコードされている転位エレメントと組み合わせてプラスミドDNAにコードされているトランスポザーゼを使用する従来の手法より毒性が小さい。本発明の適用には、それだけには限らないが、ヒトTリンパ球への免疫受容体(例えばT細胞受容体又は合成キメラ抗原受容体)をコードしている導入遺伝子の安定な組み込みが含まれ、その免疫受容体は、腫瘍細胞により発現される分子に対する特異性を与える。トランスポザーゼmRNA及びトランスポゾン小環DNAは、エレクトロポレーション及びヌクレオフェクション等のエレクトロトランスファーを含むがこれに限定されない方法によってリンパ球に導入され得る。
