This invention discloses a production process for recombinant human endostatin adenovirus in order to optimize the procedure for small batch and mass industrialization. Exemplary process include steps of: (1) fermentation of eukaryotic cells (HEK293 cells) in the condition of 37°C and 5% CO2 (2) adenovirus infection (3) collection of diseased cells (4) freezing and thawing (5) concentration by ultrafiltration and (6) preparation and packaging of recombinant human endostatin adenovirus. The process is controllable and easy to operate. The concentration of adenovirus titers can reach 1.0 x 1012-3.0 x 1012 vp/ml.Linvention concerne une méthode de production dun adénovirus recombinant codant pour lendostatine humaine, qui permet doptimiser la procédure pour lindustrialisation en masse et en petites séries. Une méthode présentée à titre dexemple comprend les étapes suivantes : (1) fermentation de cellules eucaryotes (cellules HEK293) à 37 °C et avec 5 % de CO2 (2) infection par ladénovirus (3) recueil des cellules affectées (4) congélation et décongélation (5) concentration par ultrafiltration puis (6) préparation et encapsidation de ladénovirus recombinant codant pour lendostatine humaine. Cette méthode est contrôlable et facile à mettre en oeuvre. La concentration de titres adénoviraux peut atteindre 1,0 x 1012-3,0 x 1012 vp/ml.