本发明提供了一种检测食品中志贺氏菌的有扩增内标的PCR试剂盒,涉及生物技术领域,本方法使用方便、可靠性好、检测周期短、灵敏度高、特异性强、成本低廉、操作步骤简单,适用于高通量操作、标准化操作,且能避免因为样品存在DNA聚合酶的抑制因子而得到假阴性结果导致的误判,可用于多种食品中志贺氏菌的检测等。所述方法包括:(1)利用primer premier 6.0软件设计的针对志贺氏菌的一对特异性引物ipaHF/ipaHR,再增加扩增原核生物16S rDNA保守序列的27F/1492R引物作为扩增内标,2对引物共同进行扩增;(2)取待检测样品增菌培养6‑8小时,培养后的增菌液采用煮沸冻融法提取基因组DNA作为模板进行扩增;(3)取试剂盒的PCR反应预混液配置25μl反应体系进行扩增,琼脂糖凝胶电泳后紫外灯下观察检测结果。