本发明公开了一种用于铁柱冬瓜杂交种子纯度鉴定的SSR引物SSR327,所述引物SSR327包括上游引物SSR327‑F和下游引物SSR327‑R,所述上游引物SSR327‑F的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示,所述下游引物SSR327‑R的核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示。还公开了上述铁柱冬瓜杂交种子纯度的鉴定方法,该引物能产生184bp的母本特异性标记SSR327184和199bp的父本特异性标记SSR327199,重复性好、特异性强。该方法利用上述SSR引物,能准确、快速、便捷、有效的鉴定铁柱冬瓜杂交种子纯度。