The present invention provides a single domain antibody (sdAb) scaffold comprising one or more than one non-canonical disulfide bond in the framework region (FR). The one or more than one non-canonical disulfide bond may be formed between cysteines introduced by mutations in FR2 and FR3. In the case where the sdAb scaffold is a VH, the Cys may be introduced at any one of positions (47-49) and any one of positions (67-71), based on Kabat numbering in one example, the Cys may be introduced at positions (49) and (69), based on Kabat numbering. In the case where the sdAb scaffold is a VL, the Cys residues may be introduced at any one of positions 46-49 and any one of positions (62-66), based on Kabat numbering in one example, the Cys residues may be introduced at positions (48 and 64), based on Kabat numbering.본 발명은 프레임워크 영역 (FR) 내에 하나 이상의 비-정규 디술피드 결합을 포함하는 단일 도메인 항체 (sdAb) 스캐폴드를 제공한다. 하나 이상의 비정규 디술피드 결합은 FR2 및 FR3 내에 돌연변이에 의해 도입된 시스테인들 사이에서 형성될 수 있다. sdAb 스캐폴드가 VH인 경우, 카바트(Kabat) 넘버링을 기초로 위치 47-49 중 어느 하나 및 위치 67-71 중 어느 하나에서 Cys가 도입될 수 있다 한 예에서, 카바트 넘버링을 기초로 위치 49 및 69에서 Cys가 도입될 수 있다. sdAb 스캐폴드가 VL인 경우, 카바트 넘버링을 기초로 위치 46-49 중 어느 하나 및 위치 62-66 중 어느 하나에서 Cys 잔기가 도입될 수 있다 한 예에서, 카바트 넘버링을 기초로 위치 48 및 64에서 Cys 잔기가 도입될 수 있다.
