本发明涉及一种枸杞胡萝卜素β-羟化酶基因及包括该基因的重组载体和宿主细胞及应用。选自以下核苷酸序列之一:1)具有SEQ ID No.1序列所示的核苷酸序列;2)SEQ ID No.1所示的核苷酸序列添加、取代、插入或缺失一个或多个核苷酸的70%的同源序列或者其等位基因及其衍生的核苷酸序列。通过提取新鲜枸杞叶片总RNA,用3′RACE技术克隆枸杞胡萝卜素β-羟化酶基因LmChyB,得到完整的基因序列为939bp。构建了大肠杆菌表达载体pET28a-LmChyB,应用大肠杆菌异源表达系统,对克隆的枸杞胡萝卜素β-羟化酶基因LmLycB编码的酶活性进行了鉴定,枸杞胡萝卜素β-羟化酶LmCHYB能够在β-胡萝卜素中引进两个羟基,将β-胡萝卜素催化成玉米黄质。