The invention provides a method for detecting fluorescence radiation from a fluorescence agent, the method comprising -emitting light at an excitation wavelength range (72) for causing fluorescence radiation emission in the fluorescence agent, said fluorescence radiation having a fluorescence wavelength profile (73)； -detecting light at a first fluorescence wavelength range (74) as a first detection signal (S1)； -detecting light at a second fluorescence wavelength range (81, 91) as a second detection signal (S2)； -numerically determining a third detection signal with an improved fluorescence-to- background radiation ratio based on the first detection signal (S1), the second detection signal (S2), and the fluorescence wavelength profile (73).La présente invention concerne un procédé de détection d'un rayonnement de fluorescence provenant d'un agent de fluorescence, le procédé consistant en : - l'émission d'une lumière à une plage de longueurs d'onde d'excitation (72) destinée à provoquer une émission de rayonnement de fluorescence dans l'agent de fluorescence, ledit rayonnement de fluorescence ayant un profil de longueur d'onde de fluorescence (73) ； - la détection de la lumière à une première plage de longueurs d'onde de fluorescence (74) sous la forme d'un premier signal de détection (S1) ； - la détection de la lumière à une deuxième plage de longueurs d'onde de fluorescence (81, 91) sous la forme d'un deuxième signal de détection (S2) ； - la détermination de manière numérique d'un troisième signal de détection ayant un rapport de rayonnement de fluorescence sur bruit de fond amélioré sur la base du premier signal de détection (S1), du deuxième signal de détection (S2), et du profil de longueur d'onde de fluorescence (73).
