PROBLEM TO BE SOLVED: To provide an in-vitro immunization method by which an antigen-specific antibody having a high IgG content can be produced in high efficiency.SOLUTION: There is provided the two-step in-vitro immunization method including: applying the first immunization process having an antigen sensitization step for sensitizing an immunization cell with a target antigen in vitro and a culture step for culturing an antibody-producing cell in a culture solution containing cytokine, and then applying the second immunization process having an antigen sensitization step for sensitizing the obtained target antigen-specific antibody-producing cell with the same antigen in vitro and a culture step for culturing in a culture solution containing cytokine.COPYRIGHT: (C)2010,JPO&INPIT【課題】IgG含量の高い抗原特異的抗体を高効率で産生できるインビトロ免疫法を提供する。【解決手段】免疫細胞に対して、インビトロで標的となる抗原を感作する抗原感作工程、及びサイトカインを含む培養液で抗体産生細胞を培養する培養工程を設ける第1免疫工程を施した後、得られた標的抗原特異的抗体産生細胞に対して、インビトロでの同一抗原による抗原感作工程、及びサイトカインを含む培養液中での培養工程を設ける第2免疫工程を施すことを特徴とする、2段階インビトロ免疫方法。【選択図】なし