The present invention discloses a process for the preparation of a Poly-ubiquitin chain, this process comprising ligating a Ubiquitin thioester Ubm-SR with a Ubiquitin Ubq. Further are disclosed poly-ubiquitin chains prepared according to this process, in particular poly-ubiquitin chains containing at least one unnatural amino acid.La présente invention concerne un procédé de préparation dune chaîne de poly-ubiquitine, ledit procédé consistant à lier un thioester dubiquitine Ubm-SR à une ubiquitine Ubq. Linvention concerne également des chaînes de poly-ubiquitine préparées selon le procédé de linvention, notamment des chaînes de poly-ubiquitine contenant au moins un acide aminé non naturel.